甲氨蝶呤通过诱导自噬促进类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡机制的研究

摘要

目的 明确甲氨蝶呤对RA成纤维样滑膜细胞（RA-FLS）的作用机制,为RA的药物治疗提供新的理论依据。方法 分离并培养RA-FLS,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法和流式细胞术检测甲氨蝶呤作用下的细胞活力及细胞凋亡；不用浓度或不同时间点,甲氨蝶呤作用于RA-FLS,蛋白质印迹法及免疫荧光检测RA-FLS自噬的诱导情况；微RNA干扰（siRNA）Beclin1基因,流式细胞仪及PARP p85检测甲氨蝶呤作用下RA-FLS的凋亡情况；实验数据采用独立样本的t检验,GraphPad Prism 5.0软件绘制统计图。结果 甲氨蝶呤可诱导RA-FLS细胞凋亡增加,增强RA-FLS自噬,诱导自噬体形成。在RA-FLS中,转染Beclin1基因的siRNA抑制自噬并增加甲氨蝶呤诱导的细胞凋亡。结论 RA-FLS通过自噬抵抗甲氨蝶呤的促凋亡作用,甲氨蝶呤联合自噬抑制剂可增加RA的治疗效果。