含非甲基化二核苷酸的寡脱氧核苷酸7909对X射线诱导人肺腺癌A549细胞周期阻滞和凋亡的影响与ATM激酶的关系

摘要

目的探讨含非甲基化二核苷酸的寡脱氧核苷酸（unmethylated cytosine-phosphate-guanine oligodeoxynucleotides,CpG ODN）7909对X射线诱导人肺腺癌A549细胞周期阻滞和凋亡的影响及毛细血管扩张共济失调突变（ATM）激酶磷酸化在这一过程中的作用。方法人肺腺癌A549细胞用随机表法分为5组,对照组、CpG组、单纯照射组、CpG+X射线组和ATMsiRNA+CpG+X射线组。采用集落形成法观察细胞存活率。流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡。Westernblot检测ATM激酶及其下游底物周期检测点激酶2（checkpointkinase2,Chk2）和P53蛋白的表达。结果 A549细胞经CpGODN7909预处理后,在X射线照射下生长缓慢,集落形成明显减少,与单纯照射组比较,差异有统计学意义（t=13.41,P＜0.05）;增强了X射线诱导的人肺腺癌A549细胞G2/M期阻滞和凋亡,与单纯照射组比较,差异有统计学意义（t=17.32和7.71,P＜0.05）;明显增加了X射线诱导的ATM、Chk2及P53蛋白磷酸化水平;小分子干扰RNA暂时性抑制ATM的表达后,CpGODN7909对X射线诱导G2/M期阻滞及凋亡的作用减弱,与CpG+X射线组比较,差异有统计学意义（t=26.84和2.98,P＜0.05）。结论 CpG ODN7909在体外增强了X射线诱导的人肺腺癌A549细胞ATM激酶磷酸化,这一作用可能参与G2/M期阻滞和凋亡的调节。