敲低长链基因间非编码RNA-p21对乏氧肿瘤细胞放射敏感性的影响

摘要

目的探讨敲低长链基因间非编码RNA-p21（lincRNA-p21）对乏氧肿瘤细胞放射敏感性的影响及机制。方法实时荧光定量PCR（QRT-PCR）检测人肝癌细胞SMMC7721和脑胶质瘤细胞U251MG乏氧培养不同时间lincRNA-p21的表达。构建lincRNA-p21 siRNA慢病毒载体,经慢病毒转染建立稳定敲低lincRNA-p21的SMMC7721和U251MG细胞系。流式细胞术检测乏氧肿瘤细胞周期和凋亡。克隆形成实验检测乏氧肿瘤细胞放射敏感性。Western blot检测乏氧诱导因子1α（HIF-1α）和GLUT1蛋白含量。结果 SMMC7721和U251MG细胞乏氧（1%O2）培养24和48 h,lincRNA-p21的表达随培养时间的增加逐渐升高。24和48 h与0 h组相比,lincRNA-p21表达明显升高（t=5.13、7.49、8.90、10.11,P＜0.05）。稳定转染lincRNA-p21 siRNA下调乏氧肿瘤细胞中lincRNA-p21的表达（t=144.81、334.32,P＜0.05）。乏氧（1%O2）培养48 h,敲低lincRNA-p21细胞SMMC7721和U251MG发生G2/M期阻滞（t=7.05、10.18,P＜0.05）;细胞凋亡明显增加（t=42.27、24.79,P＜0.05）;HIF-1α和GLUT1蛋白含量减少,放射敏感性增强,放射增敏比（SER）约为1.23、1.31。结论乏氧促进肿瘤细胞中lincRNA-p21表达。敲低lincRNA-p21增强乏氧肿瘤细胞放射敏感性,其机制可能与敲低lincRNA-p21诱导细胞G2/M期阻滞和细胞凋亡,并导致HIF-1α蛋白水平下降有关。