环形泰勒虫TAMS1蛋白的生物学特性分析及多克隆抗体的制备

摘要

为了解环形泰勒虫(Ta)TAMS1蛋白(Ta-TAMS1)的生物学特性及其是否具有抗原性,本研究利用PCR技术扩增环形泰勒虫Tams1基因,得到768 bp的Tams1基因目的 片段,并将其翻译成相应的蛋白,经各种生物信息学软件分析显示,Ta-TAMS1蛋白理论等电点为8.32,有30个磷酸化位点;二级结构主要由延伸链(33.59％)组成,无规则卷曲占29.69％;具有8个B细胞抗原表位,其疏水平均值为-0.75,为疏水性蛋白.构建原核表达质粒pET-28a-Tams1并转至大肠杆菌BL21中,通过IPTG诱导获得大小约32 ku的重组融合蛋白Ta-TAMS1;western blot鉴定结果显示,该重组蛋白与环形泰勒虫阳性血清呈阳性反应,反应性较好.将纯化的融合蛋白免疫兔,制备兔多克隆抗体,经间接ELISA方法检测多抗的效价.结果 显示获得了Ta-TASM1蛋白多克隆抗体,ELISA检测其效价为1∶204800.该研究为探究Ta-TAMS1蛋白的生物学功能及病原体的血清学快速检测方法奠定基础.