牛溶血性曼氏杆菌白细胞毒素、脂蛋白E和外膜蛋白A的免疫原性研究

摘要

在应激条件下,溶血性曼氏杆菌(Mh)能够引起牛的纤维素性肺炎或胸膜肺炎,对全球养牛业危害严重,免疫接种是防控Mh病的主要手段.为了评价牛源A1型Mh脂蛋白E(PlpE)、外膜蛋白A(OmpA)以及白细胞毒素(LKT)的免疫原性,本研究分别将PlpE、OmpA以及LKT的毒力效应蛋白LKTA的编码基因克隆至原核表达载体pET-28a,并在大肠杆菌中表达,采用亲和层析或电洗脱的方法对重组蛋白进行提纯.将纯化的重组蛋白rPlpE、rOmpA和rLKTA分别或组合接种BALB/c小鼠,首次免疫14 d后采用相同方法加强免疫,分别于首次免疫后14 d、21 d、28 d和35 d采集小鼠血清.采用间接ELISA方法检测小鼠血清中针对Mh的特异性IgG抗体水平,结果显示各重组蛋白均能够诱导小鼠产生针对Mh的特异性IgG抗体,而rPlpE和rLKTA诱导的抗体水平明显高于rOmpA.采用牛淋巴细胞中和试验检测rLKTA免疫小鼠血清中针对LKT的中和抗体水平,结果显示rLKTA能够诱导小鼠产生高水平的中和抗体,二免后21 d小鼠血清中的平均中和抗体滴度可达363.以致死剂量的A1型Mh菌液对免疫小鼠进行攻击,结果显示rPlpE对小鼠的保护率为50％(2/4),而rOmpA对小鼠无保护作用.综上所述,rLKTA和rPlpE能够诱导小鼠产生针对Mh的保护性免疫应答,是A1型Mh的优势保护性免疫原组分,本研究为全面了解牛源A1型Mh主要免疫保护性抗原以及Mh新型疫苗的研究奠定了实验基础.