荧光定量PCR方法在鸡马立克氏病疫苗免疫监测中的应用分析

摘要

鸡马立克氏病(MD)的防控主要依靠疫苗免疫,MD疫苗株在鸡体内的有效复制与最终的免疫效果直接相关,可通过这种相关性对MD疫苗进行免疫监测.为有效监测MD疫苗的免疫效果,本研究共采用两种血清1型MD疫苗免疫不同的鸡:(1)实验鸡分为两组:一组在1日龄时免疫血清1型MD疫苗814株,另一组为不免疫的对照组,选用双重荧光定量PCR方法分别对两组鸡免疫后7 d和14 d的脾脏和羽髓中的马立克氏病病毒(MDV)载量(log10 MDV拷贝数/106个细胞)进行检测;(2)商品鸡:选用上述双重荧光定量PCR方法分别对经血清1型MD疫苗CVI988/Rispens株免疫后7 d和14 d的商品蛋鸡脾脏和羽髓中的MDV载量进行检测.并针对荧光定量PCR的检测结果结合常规PCR检测和meq基因的序列比对分析各组鸡脾脏和羽髓样品是否被野毒感染;同时监测正常免疫商品鸡的产蛋率和死淘率等至8个月鸡龄.结果显示,实验鸡免疫后7 d,免疫组鸡脾脏和羽髓的MDV载量为3.39～4.69,对照组鸡相应样品的MDV载量为3.36～4.90;免疫后14 d,免疫组鸡MDV载量为3.77～4.86,对照组鸡相应样品的MDV载量为5.06～6.22,对照组显著高于免疫组(p<0.01).PCR鉴定和meq基因序列分析证实,对照组鸡被MDV野毒感染,导致其体内MDV载量的显著上升.商品鸡免疫后7 d,脾脏和羽髓的MDV载量为3.75～4.59;免疫后14 d,MDV载量为3.71～4.92,并且在监测期内没有发生MD.以上结果表明,利用双重荧光定量PCR方法对血清1型MD疫苗进行免疫监测时,免疫后7 d～14 d鸡体内的病毒载量为3.39～4.86,载量过高则可能发生了免疫失败或者野毒感染.本研究结果表明双重荧光定量PCR方法可以用于MD疫苗免疫效果的监测,为临床鸡MD疫苗的免疫监测提供了参考数据..