表达牛呼吸道合胞体病毒G蛋白基因的重组Ⅰ型牛疱疹病毒的构建与鉴定

摘要

为构建表达牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)G蛋白基因的牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)重组病毒,本研究将人工合成的BRSV全长G蛋白基因编码序列插入到巨细胞病毒(CMV)启动子之下构建TK基因缺失转移载体.利用磷酸钙-DNA沉淀法将该转移载体与亲本病毒BHV-1/TK~-/Lac Z~+的基因组DNA共转染牛鼻甲细胞后收获增殖的病毒.通过反向蚀斑筛选,得到重组病毒BHV-1/TK~-/G~+.PCR检测结果证实G蛋白基因已经插入到了亲本病毒BHV-1/TK~-/Lac Z~+的基因组中,间接免疫荧光试验和western blot证实BHV-1/TK~-/G~+中的G蛋白基因在感染的细胞中获得了表达.本研究为研制BRSV及其他重要牛传染病的BHV-1病毒活载体疫苗奠定了基础.