以J亚型禽白血病病毒LTR为启动子的真核表达载体构建

摘要

为构建以J亚型禽白血病病毒(ALV-J)的LTR元件为启动子的真核表达载体,本研究将ALV-J LTR克隆至pBluescript Ⅱ SK(+)载体中,并在5'LTR和3'LTR之间分别插入报告基因(eGFP)和新城疫病毒(NDV)的NP基因,得到重组质粒pSK-LTR-GFP和pSK-LTR-NP.将上述重组质粒分别转染293T细胞、BHK-21细胞和鸡胚成纤维细胞(CEF),应用RT-PCR、western blot和荧光显微镜检测目的基因的表达.结果表明,无论是在哺乳动物细胞(BHK-21和293T)还是在禽原代细胞中,LTR均能够启动外源基因(eGFP和NP)良好转录和表达.流式细胞技术分析显示,报告基因在293T细胞中的表达在48h达到峰值.本研究为利用ALV-J LTR元件构建输送或表达外源基因的质粒载体奠定了基础.