通过改进Red重组方法快速构建肠炎沙门菌毒力岛SPI-1缺失株

摘要

沙门茵依赖毒力岛SPI-1编码的Ⅲ型分泌系统在侵染宿主肠道上皮细胞中起重要作用.为制备沙门茵毒力岛SPI-1缺失株,本研究利用PCR扩增毒力岛SPI-1上下游同源臂和含有氯霉素抗性基因片段,连接pET-28a构建打靶质粒,采用电击法将其转入含有pKD46a质粒的肠炎沙门菌中.经L-阿拉伯糖诱导同源重组后,鉴定阳性重组子,转化诱导产生重组酶FLp的pCP20质粒,从而删除氯霉素抗性基因,通过PCR方法鉴定缺失株,命名为SM6ASPI-1.连续培养鉴定表明缺失株具有良好的遗传稳定性.生长特性研究显示缺失株生长速率高于野生菌株.本研究利用改进的Red重组系统通过一步法构建了肠炎沙门茵毒力岛SPI-1缺失株,为沙门茵毒力岛的功能研究与基因工程减毒疫苗研制奠定了基础.