以原核表达的猪δ冠状病毒N蛋白为包被抗原的间接ELISA方法的建立

摘要

为建立检测血清中猪δ冠状病毒(PDCoV)抗体的间接ELISA方法,本研究根据PDCoV的N基因序列设计特异性引物,扩增出N蛋白全基因序列,将其克隆至低温表达载体pCold I中并转入BL21,诱导表达获得大小约为41 ku的可溶性目的蛋白;western blot试验表明所表达的蛋白具有反应活性.以纯化的重组N蛋白作为包被抗原,建立了PDCoV间接ELISA抗体检测方法.结果表明,本研究建立的ELISA方法阴阳性临界值为0.316,与猪流行性腹泻病毒等6种猪常见病原阳性血清均无交叉反应,具有良好的特异性.批内和批间重复性试验的变异系数均小于10％,重复性和稳定性均较好.应用建立的间接ELISA方法,对收集自江西各地区282份猪血清进行检测,阳性率为12.8％(36/282),表明PDCoV在我省猪群中普遍存在.本实验建立的PDCoV抗体捕获间接ELISA为临床上猪群PDCoV感染监测和流行病学调查提供了实验依据.