饮用水中病毒浓缩与检测方法的建立及应用

摘要

目的建立饮用水中病毒浓缩与检测方法并对实际水样进行人腺病毒污染状况监测。方法以f2噬菌体为水中肠道病毒代表,投加于受试水样中,评价NanoCeram滤芯对原水和饮用水初次浓缩及不同浓度PEG 8000对初次浓缩液进行二次浓缩的效果。采用T-A克隆制备人腺病毒荧光定量PCR标准品,对所得质粒测序,应用Blast序列类似性检索工具将其与目的基因片段进行一致性检测,建立荧光定量PCR检测人腺病毒的方法。应用上述方法,于2011年对武汉两家自来水厂原水和饮用水采用。NanoCeram滤芯进行现场初次浓缩,聚乙二醇（PEG）/NaCl法进行二次浓缩,提取浓缩液中病毒DNA后进行荧光定量PCR检测,监测原水和饮水中人腺病毒污染状况。结果所建立的NanoCeram滤芯初次浓缩法对原水中的f2噬菌体回收率为（51.63±26.60）%,对饮用水中的f2噬菌体回收率为（50.27±14.35）%。当PEG 8000浓度达到0.13 kg/L时,二次浓缩回收率可达（90.09±10.50）%。所构建的人腺病毒荧光定量PCR标准品与目的基因片段序列一致度为99%,可用于人腺病毒的绝对定量。2011年,武汉市两家自来水厂原水中的人腺病毒浓度范围为（4.13×10~3～2.20×10~6）拷贝/L,出厂水中的人腺病毒浓度范围为（5.57×10~2～7.52×10~5）拷贝/L,饮用水处理过程对人腺病毒的清除率为（75.49±11.71）%。结论 NanoCeram滤芯联合PEG/NaCl法可对水环境中病毒进行有效浓缩,应用所建立的荧光定量PCR法检测发现自来水厂原水中存在人腺病毒,目前的水处理措施不能将其完全去除。