缺氧状态下瘢痕疙瘩成纤维细胞条件培养基对血管形成能力的影响

摘要

目的通过观察缺氧状态对瘢痕疙瘩成纤维细胞条件培养基诱导血管形成能力的影响,探讨缺氧微环境在瘢痕疙瘩浸润性生长中的作用。方法采用组织块法体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞,将其置入缺氧培养箱（2%O2）进行培养,并以常氧培养箱（20%O2）培养作为对照,48 h后收集上清,并与内皮细胞培养基按1∶1混合后作为条件培养基。按常规方法培养人脐静脉血管内皮细胞。采用real time PCR和ELISA法,检测缺氧刺激对瘢痕疙瘩成纤维细胞促血管生成因子如血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、血管生成素-1（angiopoietin-1,Ang-1）和periostin表达和分泌的影响;条件培养基孵育血管内皮细胞,采用CCK-8法测定其增殖情况,Transwell小室法检测其迁移和侵袭能力,基质胶小管形成实验观察其小管形成能力。结果缺氧刺激使瘢痕疙瘩成纤维细胞VEGF、Ang-1和periostin因子在mRNA水平分别增加了75%、43%、118%（P＜0.05）,在分泌蛋白水平分别增加了30.2%、14.2%、19.5%（P＜0.05）;缺氧状态下在瘢痕疙瘩成纤维细胞条件培养基孵育血管内皮细胞增殖的吸光度值,在1、2和3 d分别为0.67±0.07、0.84±0.09和1.08±0.10,均高于其对照组（0.52±0.08、0.72±0.10和0.91±0.14,P＜0.05）;缺氧状态下瘢痕疙瘩成纤维细胞条件培养基诱导血管内皮细胞的迁移、侵袭和小管形成数目分别为（73.2±8.9）、（56.3±12.5）、（9.66±1.96）个/高倍视野,均高于其对照组[（59.0±8.0）、（35.5±8.5）、（6.5±1.87）个/高倍视野,P＜0.05]。结论缺氧刺激增加瘢痕疙瘩成纤维细胞的促血管形成因子的合成分泌,其条件培养基显著增加血管内皮细胞的血管形成能力,提示缺氧微环境可能通过促新生血管形成在瘢痕疙瘩浸润性生长中起着重要作用。