ABIN-1与MOR相互作用结构域的研究及其对吗啡镇痛耐受的影响

摘要

目的研究ABIN-1与MOR相互作用的结构功能域及其影响吗啡镇痛耐受作用的脑区。方法用PCR法把ABIN-1的4个保守结构功能域短截后进行重组,用Co-ip(免疫共沉淀)实验检测它们与MOR相互作用;用AAV9包装ShRNA干扰ABIN-1后通过侧脑室和局部注射小鼠的前额皮质、海马、伏隔核21 d后,吗啡(10 mg·kg-1,sc)连续给药7 d,每天2次,第1,3,5和7天在给药前后分别用55℃热板检测小鼠缩足时间,末次给药后2 h给予纳洛酮(10 mg·kg-1,ip),观察15 min内戒断症状(跳跃次数、扭体、湿狗样摇体和舔前爪等)。结果 ABIN-1在AHD1,AHD3和AHD4 3个结构域短截后,不影响与MOR的相互作用,而AHD2短截后,ABIN-1与MOR相互作用消失。侧脑室注射ShRNA干扰ABIN-1后,吗啡的镇痛作用增强,连续吗啡给药后第3和5天,吗啡的镇痛作用较对照组明显减弱(P<0.05);海马ABIN-1下调后,吗啡的镇痛作用也增强,连续吗啡给药后第3天,吗啡镇痛作用较对照组明显增强(P<0.05);伏隔核ABIN-1下调后,小鼠的基础痛域明显降低,但对吗啡镇痛作用无影响,连续吗啡给药后第7天增强吗啡镇痛作用;前额皮质ABIN-1下调后,对吗啡作用无影响。结论 AHD2区是ABIN-1与MOR相互作用的关键结构功能域。ABIN-1在不同脑区对吗啡的镇痛耐受的影响不同,其机制有待于进一步研究。