二苯乙烯苷对C反应蛋白诱导的小鼠巨噬细胞明胶酶A和B表达的影响

摘要

目的 为探讨二苯乙烯苷(TSG)预防动脉粥样硬化斑块不稳定的可能机制,观察TSG对C反应蛋白(CRP)诱导的巨噬细胞表达明胶酶A和B的影响.方法 体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞,分为空白对照组、模型组(给CRP 20 mg·L-1)、模型+辛伐他汀100 μg·L-1组、模型+ TSG 120及60 μg·L-1组.给予CRP 12 h后加入干预药物,共同培养24 h后进行指标的检测.用蛋白免疫印迹法观察各组细胞明胶酶A和B蛋白表达的差异;用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)观察各组细胞明胶酶A和B mRNA表达的差异;ELISA法测定细胞培养液中白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNFα)含量.结果 蛋白免疫印迹分析显示,模型组明胶酶A和B蛋白的表达较空白对照组明显增加;与模型组(明胶酶A: 1.14±0.26,明胶酶B: 1.26±0.24)相比,辛伐他汀(明胶酶A: 0.71±0.12,明胶酶B: 0.73±0.15)及TSG(120 μg·L-1组: 明胶酶A, 0.74±0.11,明胶酶B, 0.88±0.13;60 μg·L-1组: 明胶酶A, 0.92±0.18,明胶酶B, 1.12±0.18)均能降低明胶酶A和B蛋白的表达,并随TSG处理浓度的增加有下降趋势.RT-PCR显示,模型组明胶酶A和B的mRNA表达较空白对照组明显增加;与模型组(明胶酶A: 2.45±0.18,明胶酶B: 2.59±0.19)相比,辛伐他汀(明胶酶A: 0.86±0.06,明胶酶B: 0.98±0.10)及TSG(120 μg·L-1组: 明胶酶A, 0.98±0.09,明胶酶B, 1.24±0.13;60 μg·L-1组: 明胶酶A, 1.32±0.12,明胶酶B, 1.80±0.15)均能降低明胶酶A和B的mRNA表达,并随TSG处理浓度的增加有下降趋势.ELISA结果显示,与空白对照组比较,模型组IL-6和TNF-α水平明显升高;与模型组[IL-6(614±52)ng·L-1,TNFα(82.5±4.7)mg·L-1]相比,辛伐他汀[IL-6 (290±32)ng·L-1,TNFα(36.3±2.7)mg·L-1]及TSG[120 μg·L-1组: IL-6 (310±28)ng·L-1,TNFα(42.1±3.1) mg·L-1;60 μg·L-1组: IL-6(498±46)ng·L-1,TNFα(58.6±3.4) mg·L-1]能明显降低细胞培养液中IL-6和TNFα含量.结论 TSG可通过抑制上调的明胶酶A和B的表达、IL-6及TNFα的分泌以抑制斑块不稳定.