低剂量氢醌、甲醛及过氧化氢刺激人胚肺成纤维细胞适应性反应的共同差异蛋白的表达

摘要

目的 研究低剂量氢醌(HQ)、甲醛(FA)及过氧化氢(H2O2)刺激引起的细胞耐受与适应反应是否存在共同机制.方法 利用已建立的HQ, FA及H2O2诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5适应性反应模型,分别选择能诱导产生适应性反应的低剂量和致死剂量的HQ, FA及H2O2交叉染毒,Alamar Blue还原率检测细胞增殖.适应剂量HQ,FA及H2O2处理细胞后,二维凝胶电泳(2-DE)分离细胞总蛋白,图像分析后选取共同变化的差异蛋白点进行质谱鉴定.结果 MRC-5细胞交叉染毒结果发现,低剂量HQ预刺激后再给予致死剂量FA或H2O2刺激,以及低剂量FA或H2O2预刺激后再给予致死剂量HQ刺激,其Alamar Blue还原率均较单独用致死剂量HQ,FA或H2O2刺激增高.低剂量HQ,FA和H2O2刺激MRC-5细胞后2-DE图谱图像分析发现,对照组MRC-5细胞检测到1519±154个蛋白点,低剂量HQ组为1551±172个,低剂量FA组为1572±179个,低剂量H2O2组为1429±159个,凝胶匹配后发现,染毒后出现4个共同消失的蛋白点,7个新增蛋白点,经肽质量指纹图谱和串联质谱鉴定了其中6个蛋白点.已鉴定的蛋白包括二磷酸核苷激酶B,蛋白磷酸酶PP1-β催化亚基,Ufm1结合酶1,肌苷-5'-单磷酸脱氢酶,α晶状体球蛋白B链,巯氧还蛋白过氧化物酶1,这些蛋白功能涉及氧化应激、细胞骨架、蛋白折叠等各个方面.结论 HQ, FA和H2O2交叉染毒可相互诱导适应性反应;低剂量HQ, FA和H2O2可诱导多种共同蛋白的表达.