细胞内钙稳态失调在腺苷致肝癌HepG2细胞凋亡的作用

摘要

目的 探讨腺苷诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及其与Ca2相关的机制.方法 CCK8法测定腺苷1.0,2.0,4.0和6.0 mmol·L-1分别作用24,36和48 h后对HepG2细胞存活的抑制率.腺苷1.0,2.0和4.0 mmol· L-1作用24 h后,AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,双波长荧光分光光度法和激光共聚焦检测细胞内游离Ca2+浓度,流式细胞术检测细胞内线粒体膜电位,实时荧光定量PCR及Western蛋白质印迹法分别检测m-钙蛋白酶、胱天蛋白酶4、Bax、Bak、胱天蛋白酶3基因和蛋白的表达.结果 腺苷可显著抑制HepG2细胞的增殖,呈浓度和时间依赖性;随腺苷浓度由1.0,2.0增加到4.0 mmol·L-1,细胞凋亡率分别由(20.30±1.23)％和(28.50±2.32)％增至(38.10±4.09)％,并伴有细胞内游离Ca2+浓度增加1.17±0.02,1.28±0.03和(1.49±0.04)倍,以及线粒体膜电位下降,由703±53分别降至504 ±34,315 ±27和124±10(P＜0.01),同时m-钙蛋白酶、胱天蛋白酶4、Bax、Bak、胱天蛋白酶3 mRNA及蛋白表达水平明显增高(P＜0.05).结论 腺苷可通过提高细胞游离Ca2+水平,激活钙依赖蛋白,并激活内源性内质网应激胱天蛋白酶4信号转导途径而诱导HepG2细胞凋亡.