RNAi抑制Wnt1信号通路对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖抑制的实验研究

摘要

目的检测人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y中Wnt1的表达情况,并通过抑制Wnt1基因的表达来干预Wnt1信号通路,观察其对神经母细胞瘤增殖的影响,阐明Wnt1信号通路与神经母细胞瘤之间的相关性。方法检测人神经母细胞瘤株SH SY5Y中Wnt1在基因和蛋白水平的表达及细胞内定位情况;将SH-SY5Y细胞分为四组,分别是阴性对照组、空白载体组、非特异性siRNA组和Wnt1-siRNA组。用针对Wnt1的特异性siRNA阻断该细胞中Wnt1信号通路的传递,分别检测上述四组细胞中Wnt信号通路中Wnt1及β-catenin浓度的变化;显微镜下观察细胞形态、数量的改变;用MTT方法检测肿瘤细胞增殖情况。结果 SH-SY5Y中的Wnt1在mRNA转录水平以及蛋白水平均有表达,且位于细胞浆内。采用Wnt1的特异性siRNA技术干预细胞后,Wnt1特异性siR-NA干预组中Wnt1蛋白的表达较阴性对照组、空白载体组及非特异性siRNA组明显下降（P＜0.01）,其下游通路中的关键蛋白β-catenin的表达同样明显下降（P＜0.01）;光学显微镜下发现特异性干预组中细胞明显较其他三组少,死亡漂浮的细胞较多,细胞突触减少;MTT结果提示,Wnt1基因表达被抑制后,SH-SY5Y细胞的增殖率明显下降（P＜0.01）。结论 Wnt1在人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y中呈阳性表达;阻断Wnt1信号通路可以抑制人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y的增殖。Wnt1信号通路可能是影响神经母细胞瘤增殖的重要通路。