siRNA沉默Id1基因对小鼠骨肉瘤细胞增殖、迁移及凋亡的影响

摘要

目的探究沉默分化抑制因子1（Id1）表达对小鼠骨肉瘤（K7M2-WT）增殖、迁移及凋亡的影响及可能的分子机制,为骨肉瘤的治疗提供新的靶点。方法实验分3组,空白对照组（Control组）,细胞未做任何处理;siRNA组重组腺病毒组（AdsiRNA组）,用带表达红色荧光蛋白基因的空载体腺病毒感染细胞;simId1重组腺病毒组（AdsimId1组）,特异性针对小鼠Id1基因的小干扰RNA重组腺病毒感染细胞。按分组分别处理K7M2-WT,用RT-PCR、Western bolt检测Id1的mRNA水平及蛋白水平表达,MTT法检测细胞增殖,划痕试验、Transwell检测细胞迁移能力,DAPI染色检测凋亡。结果 AdsimId1感染K7M2-WT 3d能沉默骨肉瘤细胞Id1基因mRNA及蛋白水平的表达。MTT显示Control组、AdsiRNA组和AdsimId1组OD值分别为0.520±0.032、0.490±0.010、0.220±0.006。沉默Id1基因抑制K7M2-WT细胞的增殖,相对Control组及AdsiRNA组抑制率分别为58%和55%（P＜0.05）。细胞划痕实验结果提示AdsimId1组细胞的迁移较Control组、AdsiRNA组减慢。Transwell实验结果:AdsimId1组的穿膜细胞数为（44.7±3.7）个,显著少于Control组（100.3±3.8）个及AdsiRNA组（103.8±4.4）个（P＜0.05）。AdsimId1组细胞凋亡较Control组、AdsiRNA组明显。结论沉默Id1基因使骨肉瘤细胞增殖和迁移能力减弱,增强骨肉瘤细胞的凋亡,为骨肉瘤治疗提供新的靶点。