G蛋白偶联受体81基因沉默联合顺铂诱导与喉癌能量代谢相关因子的研究

摘要

目的 探讨G蛋白偶联受体81(GPR81)基因沉默联合顺铂诱导对喉癌细胞中能量代谢相关因子及细胞凋亡抑制蛋白表达的影响.方法 Hep2细胞在5 μg/mL顺铂浓度下诱导0、12、24、48 h.构建shRNA-GPR81干扰质粒,转染shRNA-scramble质粒作对照,转染至Hep2细胞后经不同浓度的顺铂诱导Hep2细胞24 h,经蛋白印迹分析(Western Blot)检测单羧酸转运蛋白4(MCT4)、细胞凋亡抑制蛋白(survivin)及Na+-葡萄糖共转运蛋白(SGLT-1)在蛋白质水平的变化.结果 GPR81基因沉默的Hep2经不同浓度顺铂诱导后,MCT4整体表达下调,在1 μg/mL顺铂诱导的shRNA-GPR81组中MCT4的表达显著低于shRNA-scramble组中MCT4的表达,约为后者的0.65倍(P＜0.05).SGLT-1经不同浓度顺铂诱导后先上调,在2 μg/mL达到最大值,约为0 μg/mL的3.38倍,其后开始下降,其中2 μg/mL顺铂诱导SGLT-1在shRNA-GPR81组中表达显著高于shRNA-scramble对照组,约为后者的4.5倍(P＜0.05).Survivin经不同浓度顺铂诱导后,GPR81基因沉默的Hep2细胞中,表达呈现下调趋势,其中5 μg/mL的浓度刺激使得其表达量最低,约为0 μg/mL的0.36倍,差异具有统计学意义(P＜0.05),survivin在shRNA-scramble组表达的抑制程度比shRNA-GPR81组弱,在2 μg/mL和5 μg/mL顺铂诱导后,后者约为前者的0.62倍和0.64倍.特定浓度顺铂诱导Hep2细胞中MCT4、survivin、SGLT-1的表达随时间呈现递减趋势,其蛋白水平48 h表达量与0 h相比,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 GPR81基因沉默联合顺铂诱导可抑制MCT4表达,促进SGLT-1表达,并抑制survivin的表达.