斑马鱼Slc26A4基因敲除品系的构建

摘要

目的 SLC26A4是大前庭水管综合征(enlarged ves-tibular aqueduct syndrome,EVAS)的致病基因,也是中国第二位致聋基因.研究发现SLC26A4突变能够导致Pendred综合征(PS),包括甲状腺肿、听力丧失和前庭导水管增大,但其具体的分子机制尚不清楚.为了研究该基因在内耳发育中的具体分子作用机制,本文利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建斑马鱼Slc26A4基因敲除品系.方法 首先通过分析软件筛选出Slc26A4基因的敲除位点,利用PCR技术扩增该基因的sgDNA,再以sgDNA为模板转录得到sgRNA,将sgRNA和Cas9蛋白共同注射到斑马鱼胚胎中.结果 经基因型鉴定,CRISPR/Cas9系统对斑马鱼Slc26A4基因的敲除有效.但基因敲除不影响整体胚胎发育,斑马鱼外观未出现明显畸形.结论 使用CRISPR/Cas9系统成功建立了斑马鱼Slc26A4基因敲除突变品系,为研究该基因在内耳发育过程中的作用奠定了基础.