miR-381-3p通过靶向ERK1/2/ETS1信号通路影响MC3T3-E1细胞成骨分化

摘要

目的探讨miR-381-3p对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响和作用机制。方法慢病毒转染细胞后实验分为NC mimic miR-381-3p组、mimic miR-381-3p组、NC inhibitor miR-381-3p组和inhibitor miR-381-3p组;运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测不同组miR-381-3p的表达水平以验证转染效率;诱导MC3T3-E1细胞成骨分化后,检测各组细胞中碱性磷酸酶(ALP)活性水平;茜素红染色法检测各组细胞的成骨矿化能力;qRT-PCR测定各组细胞中ALP、Runx2、PPARγ和ETS1 mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法测定各组细胞中collagenⅠ、ALP、Runx2、PPARγ、ETS1、P-ERK1/2水平;并用MAPK/ERK通路抑制剂(PD98059)干预各组细胞后进行目的蛋白检测。结果与NC mimic miR-381-3p组、mimic miR-381-3p组及NC inhibitor miR-381-3p组比较,inhibitor miR-381-3p组中细胞中ALP、Runx2、ETS1 mRNA的水平均明显升高,并且collagenⅠ、ALP、Runx2、ETS1、P-ERK1/2蛋白的表达水平也明显升高,但是PPARγmRNA和蛋白表达水平是下调的;与其他3组对比,inhibitor miR-381-3p组中细胞的ALP活性和钙化能力检测显示均显著高表达。MAPK通路抑制后蛋白实验结果也佐证了miR-381-3p参与调控MC3T3-E1细胞的成骨分化过程。结论miR-381-3p通过下调ERK1/2/ETS1信号通路表达水平进而抑制了MC3T3-E1细胞的成骨分化能力。