可见光对视网膜色素上皮细胞氧化损伤的影响

摘要

目的观察可见光对体外培养视网膜色素上皮（RPE）细胞内活性氧（ROS）、8-羟基-2′-脱氧鸟嘌呤（8-OHdG）和8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶1（hOGG1）表达的影响。方法人RPE-19细胞按1:4至1:6传代培养。取第4～6代80%融合细胞用于实验。细胞分为白光、红光、蓝光照射组和对照组,细胞平面光照强度为600Lux。白光、红光分别照射6、12、24、48h;蓝光照射1、3、6、12h;对照组以锡纸包裹避光培养。2′,7′-二氯荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）法检测细胞内ROS表达量,免疫细胞化学（ICG）法检测细胞内8-OHdG表达量,蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测细胞内hOGG1表达情况。结果 DCFH-DA法检测结果显示,白光、红光照射组分别照射12、24、48h,蓝光照射组照射1、3、6、12h,细胞内ROS表达量均升高且随时间延长而增加,与对照组细胞内ROS表达量比较,差异均有统计学意义（F白光=11.611,F红光=6.706,F蓝光=23.259;P＜0.05）。ICG法检测结果显示,白光、红光照射组分别照射12、24、48h,细胞胞浆8-OHdG表达量增高,照射后12、24h表达量随时间延长而增加,48h有所降低,与对照组细胞胞浆8-OHdG表达量比较,差异均有统计学意义（F白光=16.032,F红光=6.378;P＜0.05）;蓝光照射组照射后1、3、6、12h,细胞胞浆8-OHdG表达量均增高,照射后6、12h细胞胞浆8-OHdG表达量较1、3h细胞胞浆8-OHdG表达量有所降低,但与对照组细胞胞浆8-OHdG表达量比较,差异均有统计学意义（F蓝光=19.484,P＜0.01）。Westernblot检测结果显示,白光、红光照射组照射12、24、48h,蓝光照射组照射6、12h,细胞内hOGG1表达量均增高,与对照组细胞内hOGG1表达量比较,差异均有统计学意义（F白光=15.121,F红光=21.041;F蓝光=12.479,P＜0.05）。结论白光、红光、蓝光能以时间依赖性方式诱导RPE细胞ROS生成增加并导致RPE细胞DNA氧化损伤。RPE细胞在可见光作用下能增加DNA糖基化酶hOGG1的表达量以对DNA氧化损伤进行修复。