^3H—花生四烯酸参入大肠杆菌膜检测细胞内外磷脂酶A2活性

摘要

目的　建立一种用同一底物检测分泌型磷脂酶A2 (sPLA2 )和胞浆型磷脂酶A2 (cPLA2 )的放射化学方法。方法　用3 H 花生四烯酸参入大肠杆菌膜 ,在一定条件下被待测PLA2 水解 ,以水解率的大小表示酶活性的高低。结果　测定cPLA2 和sPLA2 反应体系中最适pH值分别是 7.8和 8 0 ,最适钙离子浓度是 5和 13mmol/L ;cPLA2 批内CV 5 .2 % ,批间CV 10 .9% ,sPLA2 则分别是 4.9%和 7.8% ;倍比稀释实验结果具有良好的线性关系 ;急性胆囊炎患者血清sPLA2 活性明显高于正常人 ,内毒素 (LPS)诱导前后白血病K5 62细胞内和培养液中PLA2 活性差异有显著性 (P <0 .0 5 )。