干扰LRIG2通过调控PDGFRβ信号通路抑制人胶质母细胞瘤细胞增殖

摘要

目的 探讨干扰富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2(LRIG2)基因表达对人胶质母细胞瘤细胞U87增殖的影响及其机制.方法 构建LRIG2干扰(LRIG2sh)及对照(scr)慢病毒载体质粒并感染U87细胞,筛选获得稳定细胞株;CCK8检测细胞增殖及软琼脂克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;流式细胞术检测细胞周期;裸鼠皮下成瘤实验检测在体成瘤能力;Western Blotting检测信号通路蛋白表达.结果 LRIG2干扰组中LRIG2 mRNA水平及蛋白表达水平均明显低于对照组,免疫荧光示干扰组中PDGFR β荧光强度明显弱于对照组.PDGF-BB刺激下LRIG2干扰组细胞增殖率明显低于对照组(P＜0.05),且呈浓度和时间依赖性.PDGF-BB刺激下LRIG2干扰组中软琼脂克隆形成能力明显低于对照组,G0/G1期细胞数百分比明显高于对照组,S期及G2/M期细胞数百分比明显低于对照组(P＜0.01).LRIG2干扰组裸鼠皮下成瘤体积和重量明显小于对照组(P＜0.01).PDGF-BB刺激下LRIG2干扰组中pPDGFRβ及其下游pAkt、pStat3表达水平明显低于对照组,且LRIG2干扰后PDGFRβ抑制剂对其信号通路的抑制水平明显减弱.结论 LRIG2下调通过抑制PDGFRβ信号通路抑制胶质母细胞瘤细胞离体和在体增殖,LRIG2有望成为胶质细胞瘤治疗的新靶点.