EGFP在EGFP/GDNF融合基因修饰骨髓基质干细胞中的示踪作用

摘要

目的探索增强型绿色荧光蛋白(EGFP)能否作为标记基因追踪胶质源性神经生长因子(GDNF)基因修饰的骨髓基质干细胞(MSC)在体内外的存活、生长、分化和表达外源目的基因的情况.方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法从新生小鼠大脑皮质细胞克隆出GDNF cDNA片断,连入pEGFP-C1载体,构建表达EGFP和GDNF融合蛋白的质粒并转染MSC,将稳定表达EGFP-GDNF基因的细胞株植入小鼠纹状体.用荧光显微镜和免疫组织化学的方法在体内外观察MSC.结果成功制备EGFP-GDNF融合基因修饰的MSC工程细胞,免疫组织化学方法检测显示GDNF呈强阳性,在体内外MSC工程细胞均发出明亮的绿色荧光,并且绿色荧光可反映细胞形态学变化.结论在EGFP-GDNF融合基因修饰的MSC工程细胞中EGFP可作为标记基因同时标记GDNF和MSC.