基因敲除促进小鼠脊髓损伤处巨噬细胞向M2型分化

摘要

目的探讨条件性敲除细胞因子信号转导抑制蛋白3（SOCS3）基因后小鼠脊髓损伤处巨噬细胞表型变化及运动功能恢复情况。方法以神经系统条件性敲除SOCS3基因的基因工程小鼠（Socs3fl/fl Nes cre）（实验组）及未敲除SOCS3基因的同窝小鼠（Socs3fl）（对照组）为研究对象,每组40只。2组小鼠分别各取35只对T10节段脊髓施以钳夹伤,另5只仅做假手术对照。每组分别取15只损伤模型小鼠在术后3、7、14 d用于免疫荧光染色检测Arginase1（巨噬细胞M2a型、M2c型表型标志物）及CD86（巨噬细胞M1型、M2b型表型标志物）表达;每组分别取剩余20只损伤模型小鼠在术后1、3、7、14 d用于荧光定量RT-PCR检测Arginase1、CD206（巨噬细胞M2型表型标志物）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、CD32（巨噬细胞M1型表型标志物）及SOCS3、信号传导与转录激活因子3（STAT3）基因表达,并以假手术对照小鼠为基线;在术后1、3、7、14 d采用BMS量表评价小鼠后肢及躯干运动功能。结果行为学实验结果显示:实验组小鼠BMS评分在术后3、7、14 d明显高于对照组,差异均有统计学意义（P＆0.05）。对Iba1与CD86及Arginase1共染色细胞进行计数半定量分析发现:实验组中Iba1与Arginase1共染色阳性细胞在术后3、7、14 d明显多于对照组,差异均有统计学意义（P＆0.05）;实验组中Iba1与CD86共染色阳性细胞在术后7、14 d明显少于对照组,差异均有统计学意义（P＆0.05）。荧光定量PCR结果显示:术后1、3 d,实验组SOCS3基因表达量较对照组明显减低,差异均有统计学意义（P＆0.05）。术后3、7、14 d,实验组STAT3基因表达量较对照组明显增高,差异均有统计学意义（P＆0.05）。与对照组相比,术后7 d实验组Arginase1及CD206基因表达量明显增加,差异均有统计学意义（P＆0.05）;与对照组相比,术后14 d实验组CD206基因表达量明显增加,CD32基因表达量明显降低,差异均有统计学意义（P＆0.05）。结论 SOCS3基因敲除可促进小鼠脊髓钳夹损伤处巨噬细胞向M2型分化,并获得较好的运动功能恢复。