X线照射后耐替莫唑胺U251细胞株中多药耐药基因及P-gp蛋白的表达

摘要

目的观察耐替莫唑胺人脑胶质瘤U251细胞（U251 /TR）经放射线照射后多药耐药基因（MDR1）及P-糖蛋白（P-gp）表达的改变。方法体外常规培养U251细胞,低浓度替莫唑胺分步诱导法诱导建立耐药细胞U251/TR。细胞活性检测试剂盒（CCK-8）检测替莫唑胺、阿霉素、依托泊苷、硫酸长春新碱和环磷酰胺对U251、U251/TR细胞的相对抑制率和耐药指数（RI）。采用双光子医用直线加速器产生的不同剂量（2、4、6、8、10、12、15 Gy）X线照射U251、U251/TR细胞24 h后,RTPCR检测细胞MDR1的表达,Western blotting检测细胞膜P-gp的表达。结果 CCK-8检测结果显示替莫唑胺、阿霉素、环磷酰胺、依托泊苷、硫酸长春新碱对U251细胞的抑制率分别为（19.3± 0.04）%、（39.9±0.13）%、（28.1±0.09）%、（66.2±0.02）%、（26.3±0.11）%,对U251 /TR细胞的抑制率分别为（3.2±0.03）%、（15.3±0.09）%、（4.1±0.03）%、（45.6±0.10）%、（10.8±0.04）% ,U251 /TR细胞对上述5种药物的RI分别为U251细胞的2.63、2.76、2.15、10.58、3.54倍;RT-PCR检测显示:2 Gy、4 Gy、6 Gy放射线照射U251/TR和U251细胞后,2种细胞的MDR1基因表达均依次下降,且6 Gy时降至最低。但经大剂量如8 Gy、10 Gy、12 Gy、15 Gy X线照射后,2种细胞的MDR1基因表达开始依次上升,均高于6 Gy照射组。Western blotting结果显示:6 Gy放射线照射U251 /TR和U251细胞后,P-gp的蛋白表达均下降。结论小剂量的X线（8 Gy以下）照射后U251、U251/TR细胞的放射敏感性均增高,但大剂量的X线（8 Gy以上）照射后U251/TR、U251细胞均产生放射抗拒。