阻断泛素-蛋白酶体通路诱导PC12细胞死亡和泛素阳性包涵体生成

摘要

目的探讨泛素-蛋白酶体通路的功能障碍对于多巴胺能细胞的活力以及胞质内包涵体生成的影响.方法应用蛋白酶体抑制剂lactacystin(5 μmol/L、10 μmol/L、15 μmol/L和20 μmol/L)处理PC12细胞24 h,MTT方法检测细胞活力,Western Blot方法测定细胞内泛素化蛋白质水平,免疫荧光细胞化学染色观察泛素免疫阳性包涵体的生成.结果经5 μmol/L、10 μmol/L、15 μmol/L和20 μmol/L lactacystin处理24 h后,PC12细胞的活力显著降低(细胞存活率分别为81.5%±3.6%、75.4%±2.4%、70.2%±2.7%和60.4%±3.9%),呈现剂量依赖性.Western Blot证实对照组细胞内未检测到相对高分子质量的泛素化蛋白质;随着lactacystin作用浓度的增加,细胞内相对高分子质量泛素化蛋白质的含量逐渐增高.免疫荧光染色显示对照组中仅有极少数细胞内含有泛素阳性包涵体;20 μmol/L lactacystin处理组中含有泛素阳性包涵体的细胞数目显著增多(P<0.01). 结论泛素-蛋白酶体通路的功能缺失能诱导多巴胺能细胞死亡,造成细胞内泛素化蛋白质积聚,促进胞质内泛素阳性包涵体的生成,可能在帕金森病黑质多巴胺能神经元变性死亡和Lewy小体形成中发挥重要作用.