小鼠AChR(m97-116)肽段-CD205融合单链抗体的表达及活性检测

摘要

目的 构建小鼠AChR (m97-116)肽段-CD205融合单链抗体原核表达载体,表达融合单链抗体(m97-116-scFv205),检测其对未成熟树突状细胞(iDC)的亲和力,为通过iDC诱导AChR特异性免疫耐受提供实验基础.方法 分离培养小鼠原代骨髓祖细胞,经粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)10 ng/mL和白细胞介素4(IL-4)10 ng/mL刺激培养,经脂多糖(LPS)1 ng/mL诱导24 h后,高倍显微镜及扫描电镜观察细胞形态;流式细胞术(FCM)检测细胞表面相关分子表达,对iDC表型进行鉴定;构建原核表达载体m97-116scFv205-pET22b(+),0.1 mmol/mL异丙基硫代半乳糖苷(IPTG) 18℃诱导表达18 h,镍(Nj)柱纯化,SDS-PAGE和Western blot检测融合单链抗体m97-116-scFv205表达及纯化;FCM检测其与iDC的亲和力.结果 形态学观察提示培养细胞为DC,FCM结果显示培养细胞符合iDC表型;SDS-PAGE和Western blot在上清中检测到m97-116-scFv205可溶性表达;亲和力检测显示m97-116-scFv205与iDC具有较高亲和力.结论 成功构建并表达m97-116-scFv205融合单链抗体,该抗体与iDC具有较高的亲和力,为下一步靶向iDC诱导AChR特异性免疫耐受治疗重症肌无力奠定了良好的实验基础.