调节性T细胞对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的治疗研究

摘要

目的 通过剔除和移植调节性T细胞（regulatory T cells, Treg）正反两个方面来研究Treg细胞在实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE）疾病发展中的作用,探讨Treg细胞在EAE病程发展中扮演的角色。方法 首先通过注射抗小鼠CD25的单克隆抗体来剔除小鼠体内天然产生的Treg细胞,再利用人工合成的MOG35-55短肽对小鼠进行EAE诱导,观察和比较Treg细胞剔除和未剔除的小鼠在EAE病程中EAE评分上的差异。利用流式细胞术分析小鼠体内CD4＋Foxp3＋的Treg细胞数量和比例在EAE病程中的动态变化。用磁性激活细胞分选术（MACS）和荧光激活细胞分选术（FACS）相结合的方法,从Foxp3GFP＋转基因小鼠中分离出GFP标记的Treg细胞,然后将分离出的GFP标记Treg细胞通过尾静脉注射到免疫后6 d的EAE小鼠体内,观察Treg细胞移植对EAE小鼠的治疗效果。结果 在给小鼠注射抗CD25的单克隆抗体后,流式细胞术检测表明小鼠血液中天然产生的Treg细胞剔除率大于95%。经EAE诱导后,与对照组（注射PBS）小鼠相比,Treg细胞剔除小鼠的疾病程度更为严重,差异显著。通过流式细胞术分析Treg细胞在整个EAE病程中的动态变化,发现在EAE诱导后的第6天,小鼠血液中CD4＋Foxp3＋的Treg细胞比例最低（约11%）,因而我们把EAE诱导后6 d作为Treg细胞移植的时间点。从经EAE诱导后6 d的Foxp3GFP＋转基因小鼠的脾脏和淋巴结中分离出CD4＋GFP＋的Treg细胞,将之通过尾静脉注射给同样经EAE诱导后6 d的野生型小鼠。与对照组相比,接受了Treg细胞移植的小鼠EAE评分明显降低,且差异具有统计学意义。结论 Treg细胞剔除小鼠的EAE评分明显比未剔除的对照组小鼠高；而Treg细胞移植可使小鼠的EAE评分明显降低,说明移植的Treg细胞在EAE病程中对小鼠起到一定的保护作用,Treg细胞移植可能作为一种有效的治疗多发性硬化症（multiple sclerosis,MS）的细胞疗法。