人血管内皮生长因子受体胞外1-3、2-3 loopcDNA在酵母中的表达及其生物学活性研究

摘要

目的在酵母中实现人血管内皮生长因子（hVEGF165）受体FLT-1胞外1-3及2-3 loop cDNA的高效分泌性表达，并比较两种表达产物的生物学活性。方法构建酵母重组表达质粒pPIC9K/FLT-1(1-3)及pPIC9K/FLT-1(2-3)，并分别转化酵母宿主菌GS115。表达产物经CM-Sepharose FF阳离子交换层析和Sephacryl S-100分子筛层析纯化后测定其生物学活性。结果 SDS-PAGE显示，表达产物以可溶性分子形式存在于上清中，诱导4*!d的表达量占上清总蛋白的60%以上。表达的sFLT-1(1-3)及sFLT-1(2-3) 都具有结合hVEGF165的能力和抑制hVEGF165对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的促增殖功能，其中前者的作用虽较强，但二者相差不大。结论获得了具有生物学活性的可溶性重组FLT-1受体胞外区1-3及2-3 loop小片段，为进一步的动物实验和临床应用提供有益的资料。