牙龈卟啉单胞菌临床菌株fimA基因变异性和表达频率及其重组表达产物的致炎作用

摘要

目的了解牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)fimA基因变异性,构建fimA基因原核表达系统,鉴定其表达产物(rFimA)的致炎作用,检测FimA在Pg临床菌株中表达频率,了解FimA与慢性牙周炎的关系.方法采用高保真PCR从6株Pg临床菌株中扩增fimA基因并测定其核苷酸序列.构建fimA基因原核表达系统,制备rFimA兔抗血清.采用Western blot鉴定rFimA抗原性和免疫反应性.建立ELISA检测38株Pg临床菌株FimA表达情况和97例慢性牙周炎患者212份龈下菌斑标本中的FimA.检测rFimA诱导人脐静脉内皮EVC-304细胞分泌IL-1、IL-8、TNF-α和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的作用.结果 6株Pg临床菌株fimA基因核苷酸序列完全相同.所构建的原核表达系统rFimA产量高达细菌总蛋白的50%左右.rFimA可与Pg全菌抗血清发生结合反应,免疫家兔可获得高效价抗体.94.7%(36/38)菌株和91.5%(194/212)龈下菌斑标本ELISA结果阳性.1和10μg的rFimA作用EVC-304细胞48 h,其分泌的IL-1α水平升高(P＜0.05);但作用12 h即可出现高水平的ICAM-1(P＜0.05),未发现有诱导IL-8和TNF-α的作用(P＞0.05).结论 fimA基因序列保守,在Pg临床菌株中有很高的表达频率.rFimA有良好的抗原性和免疫反应性,可作为Pg血清学检测试剂盒和段疫苗的候选抗原.rFimA有较强的诱导细胞分泌ICAM-1的作用.