霍乱弧菌减毒活疫苗候选株IEM109的构建

摘要

目的构建保护性抗原基因整合于染色体上的霍乱弧菌活疫苗候选株,减弱毒力和增强其遗传稳定性. 方法以我们筛选的天然不含霍乱毒素的疫苗候选株IEM101为出发株,通过基因重组技术将IEM101染色体上与噬菌体复制整合有关的TLC因子、attRS位点及具细胞毒作用的RTX基因簇同时进行缺失,并插入具免疫原性的ctxB基因及介导噬菌体免疫的rstR基因,构建疫苗候选株IEM109.GM1-ELISA法检测IEM109中ctxB基因的表达情况.细胞培养观察候选株对哺乳动物细胞Hep-2的毒性作用. 结果 PCR及原位杂交均证实霍乱弧菌疫苗候选株IEM109中TLC因子、attRS位点、rtxA、rtxC基因被缺失,而ctxB、rstR基因整合入染色体DNA.GM1-ELISA示ctxB基因表达良好.IEM109对Hep-2细胞的毒性作用消失. 结论构建了出发株染色体上毒力相关基因簇被保护性抗原基因替换的重组改造菌株,可作为候选株进行进一步的免疫效果考核.