体内电穿孔对报告基因表达和HIV GagDNA疫苗诱导的免疫反应的影响

摘要

目的 研究体内电穿孔递送途径在小鼠模型中对于报告基因表达水平及HIV GagDNA疫苗所诱导的免疫反应的影响.方法 构建荧光素酶(luciferase)表达质粒p1.0-luc,将其通过直接肌肉注射、肌注后以双针电极进行电穿孔、肌注后以钳式电极进行电穿孔等3种不同方法注射小鼠,72 h后取注射部位的肌肉测定luciferase的表达情况.同时构建携带密码子优化的HIV-1 B'/C重组亚型CN54株gag基因的DNA疫苗质粒p1.0-gag,在10μg、100μg两个剂量水平上通过以上3种不同的方法免疫BALB/c雌性小鼠,ELISA方法检测Gag特异的抗体反应,ELISPOT方法和细胞内因子染色(intraeellular cytokine staining,ICS)技术检测细胞免疫应答.结果 通过体内电穿孔可以使luciferase在小鼠肌肉中的表达水平显著提高,最大提高幅度达到66倍.Gag DNA疫苗免疫结果显示,电穿孔可以显著提高Gag特异的体液免疫应答,其中使用双针电极的效果要显著好于钳式电极,前者所诱导的抗体滴度比不使用电穿孔组提高可达28倍.但体内电穿孔对于Gag特异的细胞免疫应答并没有显著影响.结论 体内电穿孔(尤其是使用双针电极)可以大幅度提高报告基因在体内的表达水平和DNA疫苗诱导的抗原特异性体液免疫应答.