体内电穿孔在质粒介导的基因转移及DNA免疫中的应用

摘要

目的研究体内电穿孔技术对于质粒DNA介导的体内基因表达以及HIV-1 Env DNA疫苗免疫效果的影响。方法将携带荧光素酶Luciferase基因的表达质粒p1.0-Luc和携带HIV-1CN54 env基因的DNA疫苗质粒p1.0-gp1455m通过单独肌肉注射或肌肉注射后加电穿孔两种不同方法注射小鼠。用IVIS（?）活体成像系统实时检测Luciferase报告基因在体内的表达情况。用ELISA检测HIV-1 Env特异的抗体反应,用IFN-γELISPOT检测HIV-1 Env特异的T细胞免疫反应。结果体内电穿孔技术可以显著提高Luciferase在小鼠体内的表达水平,幅度达35倍。HIV-1 Env DNA疫苗免疫结果显示,8μg质粒剂量电穿孔途径诱导的体液和细胞免疫应答强于40μg质粒剂量单纯肌肉注射组;体内电穿孔途径免疫2次与单纯肌肉注射途径免疫3次诱导的体液和细胞免疫应答水平相当。结论体内电穿孔技术可以大幅度提高报告基因在体内的表达水平和DNA疫苗的免疫应答。