深圳地区结核分枝杆菌耐药分离株分子特征与表型特征相关性研究

摘要

目的研究深圳地区2007—2008年分离的结核分枝杆菌耐药株分子特征与表型特征的相关性。方法参照WHO/IUATLD标准,使用L-J药敏培养基,1%比例法药敏试验筛选针对异烟肼、利幅平、链霉素、氧氟沙星、卡那霉素5种药物耐药或敏感的临床分离株,通过PCR扩增经筛选菌株的rpoB、katG、rpsL、rrs~1、gyrAB、rrs~2基因的相关序列,运用DNAStar和BLASTN进行序列分析,应用二倍稀释法测定其表型最低抑菌浓度（MIC）值。结果筛得实验菌株123株,其中耐药株73株,全敏感株50株。异烟肼耐药株katG基因突变率为84.6%,突变位点全部为S315T或S315N。利福平耐药株rpoB基因突变率为93.6%,突变位点主要集中在S531L（30/44,68.2%）和H526D（9/44,20.5%）或H526R（1/44,2.3%）。链霉素耐药株以rpsl基因突变为主,突变位点为K43R（19/27,70.4%）和K88Q（6/27,22.2%）;rrs~1基因突变较少见,仪491C→T（2/27,7.4%）及513A→C（1/27,3.7%）;2个基因突变率合计为65.9%。氧氟沙星耐药株突变率为100%,以gyrA基因突变为主,突变位点包括D94A（2/11,18.2%）、S91P（4/11,36.4%）和A90V（3/11,27.3%）,3个突变位点总突变率为81.8%（9/11）;S95T存在于所有氧氟沙星耐药株及部分全敏感株gyrA基因中;gyrB未发现突变。卡那霉素耐药株rrs~2基因突变率为61.1%;突变位点为1400 A→G（9/11,81.8%）和1483 G→T（2/11,18.2%）。其他突变位点在全敏感株中未发现。临床耐药株同一耐药组别所包含耐药类型不同,相关耐药基因的突变位点相同,其MIC值基本一致;相关耐药基因突变位点不同,其MIC值存在明显差异。结论结核分枝杆菌耐药基因突变存在一定的地域特性,表型特征因耐药基因突变位点不同存在耐药程度差异。