香烟烟雾暴露对肺气肿小鼠CD4+IL-17+辅助性T细胞的影响

摘要

目的探讨香烟烟雾暴露对肺气肿小鼠肺实质、外周血中CD4+IL-17+辅助性T细胞（Th17）的影响。方法将40只雄性BALB/c小鼠按随机数字表法分为4组:对照12周组（C12）、对照24周组（C24）、烟雾暴露12周组（S12）、烟雾暴露24周组（S24）,每组10只。香烟烟雾暴露法建立小鼠肺气肿模型。HE染色观察小鼠肺气肿的改变,计算平均内衬间隔（Lm）和肺泡破坏指数（DI）;酶联免疫吸附法检测小鼠支气管肺泡灌洗液中IL-17、干扰素（IFN）-γ和肿瘤坏死因子（TNF）-α水平及肺实质中IFN-γ和TNF-o水平;流式细胞术检测小鼠肺实质、外周血中CD4+IL-17+T（Th17）细胞占CD4+T细胞的百分比;免疫荧光PCR法检测小鼠肺实质、外周血中RORγt和IL-17的mRNA表达,并分析这些指标的相互关系。结果 （1）S12组和S24组Lm为（39.19±3.51）μm和（46.87±7.16）μm,DI为39.13±1.57和45.16±3.13,均明显高于C12组和C24组（32.60±3.21）μm和（32.38±3.73）μm及28.23±1.62和28.86±2.07,以S24组增高更为明显,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。（2）S12组和S24组BALF中IL-17、IFN-γ及TNF-α水平[（119.72±10.72）ng/L和（296.40±14.00）ng/L、（129.7±22.2）ng/L和（251.1±62.4）ng/L,（17.35±1.60）ng/L和（36.35±1.43）ng/L]较C12组和C24组[（52.06±4.70）ng/L和（51.89±6.82）ng/L、（85.8±26.8）ng/L和（88.9±11.5）ng/L,（6.41±0.90）ng/L和（5.85±0.92）ng/L]明显增高;在肺实质中,S12组和S24组IFN-γ及TNF-α水平[（1124.3±174.4）ng/L和（1342.7±206.1）ng/L,（77.2±13.7）ng/L和（101.7±19.0）ng/L]亦较C12组和C24组[（946.2±81.9）ng/L和（1027.2±188.3）ng/L,（62.1±16.1）ng/L和（64.4±15.1）ng/L]明显增高;且以S24组增高更为明显,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。（3）S12组和S24组肺实质中Th17细胞比例[（3.27±1.12）%和（7.19±2.24）%]明显高于C12组和C24组[（1.80±0.75）%和（1.99±0.59）%];S12组和S24组外周血中Th17细胞比例[（1.96±0.61）%和（3.82±1.26）%]亦明显高于C12组和C24组[（0.90±0.37）%和（0.97±0.32）%];且以S24组增高更为明显,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。（4）S12组和S24组肺实质中RORγt和IL-17 mRNA表达量（1.73±0.35和4.52±1.15,4.00±0.87和83.43±21.01）较C12组和C24组（0.83±0.21和0.90±0.36,0.80±0.22和0.64±0.31）明显增高,以S24组增高更为明显,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;外周血中,S12组和S24组RORγt和IL-17 mRNA表达量（1.48±0.32和2.75±0.79,201.25±5.49和416.22±99.64）亦较C12组和C24组（0.59±0.25和0.75±0.36,24.90±5.49和22.28±4.24）明显增高,以S24组增高更为明显,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。（5）烟雾暴露组中,外周血和肺实质的Th17细胞比例均与Lm、DI值显著正相关（r值分别为0.767、0.772;0.722、0.706,均P＜0.05）。结论 Th17细胞在香烟暴露肺部炎症、肺气肿小鼠外周血及肺内表达增高,并伴活性的增强,且随烟雾暴露时间延长而增强,提示香烟暴露肺气肿小鼠Th17细胞上调可能是导致小鼠肺内及全身炎症反应放大的原因之一。