急性期川崎病患者p300-TIP60/Sirt1与Foxp3蛋白乙酰化的相关性研究

摘要

目的探讨p300-TIP60/Sirt1对急性期川崎病（KD）Foxp3蛋白乙酰化的影响及其在KD免疫发病机制中的作用。方法急性期KD患儿38例,正常同年龄对照组32例,KD患儿分别于丙种球蛋白（IVIG）治疗前、后直接取血备检。采用免疫共沉淀-印迹法检测外周血CD4+T细胞Foxp3蛋白乙酰化及p300、TIP60和Sirt1结合水平;流式细胞术检测外周血CD4+CD25highFoxp3+细胞（Treg）比例及Foxp3、pAMPK、p300、TIP60、Sirt1蛋白表达水平:实时荧光定量PCR检测Treg细胞细胞毒T淋巴细胞相关抗原4（CTLA-4）、糖皮质激素诱导肿瘤坏死因子受体（GITR）、IL-10、肝激酶B1（LKB1）、烟酰胺磷酸核糖基转移酶（NAMPT）、早期生长应答因子-1（EGR-1）、转化生长因子β受体-1（TGF-βRⅠ）mRNA表达;ELISA检测外周血血浆中TGF-β浓度。结果 （1）急性期KD患儿Treg细胞比例、抑制功能相关分子表达（CTLA-4、GITR、IL-10）、Foxp3蛋白及乙酰化水平显著降低（P＜0.05）,其中KD合并冠状动脉损伤组（KD-CAL+）前述各项均低于无冠状动脉损伤组（KD-CAL-,P＜0.05）,经IVIG治疗后明显恢复（P＜0.05）。（2）急性期KD患儿Treg细胞乙酰化酶p300、TIP60表达及Foxp3结合水平显著下调（P＜0.05）,而去乙酰化酶Sirt1表达及Foxp3结合水平明显增加（P＜0.05）,且p300/Sirt1、TIP60/Sirt1表达比值与Foxp3蛋白乙酰化水平呈正相关关系（r=0.52、0.46;P＜0.05）,经IVIG治疗后均明显恢复（P＜0.05）。其中KD-CAL+组p300、TIP60表达及Foxp3结合水平明显低于KD-CAL-组（P＜0.05）,而Sirt1表达及Foxp3结合水平则明显高于后者（P＜0.05）。（3）急性期KD患儿血浆TGF-β及Treg细胞TGF-βRⅠ、EGR-1表达显著下调（P＜0.05）,而LKB1、pAMPK、NAMPT表达明显增加（P＜0.05）,其中KD-CAL+组前3项明显低于KD-CAL-组（P＜0.05）,而LKB1、pAMPK、NAMPT表达明显高于KD-CAL-组（P＜0.05）,经IVIG治疗后均有不同程度恢复（P＜0.05）。结论 p300-TIP60/Sirt1表达失衡所导致的Foxp3蛋白乙酰化水平低下可能与急性期KD患儿免疫功能紊乱有关。