高强度聚焦超声制备肿瘤抗原致敏树突状细胞及其体外诱导T细胞产生IFN-γ的研究

摘要

目的探讨采用高强度聚焦超声(HIFU)辐照肿瘤细胞制备肿瘤抗原致敏树突状细胞(DC)和制备DC肿瘤疫苗的可行性.方法 (1)采用1 ng/ml IL-4和10 ng/ml GM-CSF联合诱导小鼠骨髓细胞产生DC,并用流式细胞仪检测DC的CD80、CD86、H-2Kd和I-Ad表达情况;(2)固定辐照时间或超声声强,应用不同声强或辐照时间的HIFU辐照CT26细胞株后,用台盼蓝染色、MTT法检测活肿瘤细胞数,同时用台盼蓝染色观察肿瘤细胞的形态学变化,分析HIFU剂量与肿瘤细胞存活率的关系,了解剂量-效应关系;(3)固定辐照时间和超声强度,HIFU辐照CT26细胞悬液,制备肿瘤细胞抗原并致敏DC,致敏DC与T细胞共孵育48 h后提取上清液,通过ELISA法检测上清中IL-12、γ干扰素(IFN-γ)的含量,并与冻融组、单纯CT26、对照组进行比较.结果 (1)采用IL-4和GM-CSF联合诱导小鼠骨髓细胞可培养出典型的DC;(2)固定辐照时间,随着HIFU辐照剂量的增加肿瘤细胞的存活率迅速减少,肿瘤细胞的碎片逐渐增多,当声强为1000 W/cm2,辐照30 s时,无细胞存活,肿瘤细胞失去正常形态,全部被撕裂成碎片;(3)通过ELISA法检测HIFU、冻融及单纯CT26组上清液中IL-12、IFN-γ的含量显著高于对照组(P均＜0.05),HIFU及冻融组上清液中IL-12、IFN-γ的含量高于单纯CT26组(P均＜0.05),但HIFU、冻融组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 HIFU能灭活肿瘤细胞并能使肿瘤细胞破碎,HIFU制备的肿瘤抗原可体外致敏DC,并可使DC成熟分泌大量IL-12,同时诱导T细胞分泌大量IFN-γ.