Colgalt2敲除对刀豆蛋白A诱导的自身免疫性肝炎小鼠CD4 T细胞记忆和归巢的影响

摘要

目的初步探索糖基转移酶Colgalt2基因敲除对刀豆蛋白A(concanavalin A,Con A)诱导的自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)小鼠模型中CD4 T细胞记忆和归巢的影响。方法随机抽取无特定病原体(specific pathogen free,SPF)级6~8周的基因敲除(Colgalt2^(-/-))小鼠与野生型Colgalt2^(+/+)小鼠各18只,建立Con A诱导的AIH小鼠模型。检测小鼠血浆中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)水平,采用HE染色观察肝组织病理变化,采用体外磁珠分选脾脏CD4^(+)T细胞,采用流式细胞术检测小鼠外周血、脾脏及分选后CD4^(+)T细胞亚型比例。结果与Colgalt2^(+/+)小鼠相比,Con A刺激12 h Colgalt2^(-/-)小鼠血清ALT[(15610±2869)U/L vs(5009±1042)U/L;t=3.474,P=0.006]和AST[(16080±2631)U/L vs(4453±893.7)U/L;t=4.185,P=0.002]水平均显著升高。Con A刺激12 h Colgalt2^(-/-)小鼠肝损伤分级显著高于Colgalt2^(+/+)小鼠[(3.17±0.17)级vs(2.17±0.17)级],差异有统计学意义(t=4.243,P=0.002)。Con A刺激12 h Colgalt2^(-/-)小鼠脾脏CD4^(+)CD28^(-)[(97.80±0.46)%vs(88.85±3.35)%;t=2.650,P=0.024]和CD4^(+)CD62L^(-)[(97.98±0.46)%vs(88.68±3.38)%;t=2.669,P=0.023]均显著高于Colgalt2^(+/+)小鼠。体外脾脏实验表明,Con A刺激12 h Colgalt2^(-/-)小鼠CD4^(+)CD28^(-)[(94.88±1.20)%vs(82.97±2.70)%;t=4.295,P=0.002]和CD4^(+)CD62L^(-)[(99.95±0.02)%vs(99.24±0.26)%;t=2.731,P=0.021]均显著高于Colgalt2^(+/+)小鼠。结论Colgalt2基因敲除使脾脏CD4^(+)CD28^(-)和CD4^(+)CD62L^(-)细胞亚群表达上调从而加重Con A诱导的AIH。