一种新型快速检出分枝杆菌变色液体培养基的评价

摘要

@@结核病的早期发现主要靠实验室诊断，涂片抗酸染色（或荧光染色）找抗酸杆菌阳性率低（10%～20%）；常用的固体培养基阳性率虽可达40%。但时间长。尽管BACTEC 460TB检测系统能快速检出分枝杆菌，但其仪器及试剂价格昂贵、且有放射性污染［1］。近年来，变色液体培养基在国外应用的越来越广泛［2］。我们将一种新型的分枝杆菌快速变色液体培养基与改良罗-琼（Lowenstein-Jensen,L-J）培养基进行了比较研究，现将结果报道如下。rn 一、材料rn 1.标准菌株：人型结核分枝杆菌、浅黄色分枝杆菌、草分枝杆菌、戈登分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、胞内分枝杆菌、马耳摩分枝杆菌、爱知分枝杆菌、田鼠分枝杆菌、偶发分枝杆菌、副偶发分枝杆菌、龟分枝杆菌龟亚种、龟分枝杆菌脓肿亚种、耻垢分枝杆菌、次要分枝杆菌、非洲分枝杆菌、胃分枝杆菌、不产色分枝杆菌、金色分枝杆菌、新金色分枝杆菌、鸟分枝杆菌、瘰疬分枝杆菌、卡介苗和蟾蜍分枝杆菌由我们研究所保藏。rn 2.标本：141份临床标本，其中139份痰、1份伤口脓性分泌物和1份支气管肺泡灌洗液。rn 3. 快速变色液体培养基：由深圳市怡百世生物技术有限公司提供。其主要成分为磷酸盐缓冲液、谷氨酸钠、多种维生素、多种微量元素、甘油、马血清、变色剂以及甲氧苄氨嘧啶、氨苄青霉素、多粘菌素B、两性霉素B和萘啶酸等多种抗生素。rn 4. 改良罗-琼（L-J）培养基：按照文献［1］配制。rn 二、方法rn 1.取对数生长期的标准人型结核分枝杆菌和偶发分枝杆菌于含10%吐温80磨菌瓶中，磨菌混匀，用无菌磷酸盐缓冲液调其浊度为No1 MacFarland单位，再用无菌磷酸盐缓冲液作1∶10系列稀释，各分别接种100 μl于变色液体培养基和改良L-J培养基，37℃培养。当培养基变为紫红色或底层有紫色颗粒沉淀时，取少量液体涂片，进行金胺O荧光染色证实为分枝杆菌。rn 2. 标本处理：标本经2～4倍体积的4%NaOH消化20 min，离心10 min，沉淀经无菌磷酸盐缓冲液洗涤2次，再加入400 μl无菌磷酸盐缓冲液，混匀后，分别取200 μl接种于变色液体培养基和改良L-J培养基，37℃培养。rn 3．结果观察与报告：变色培养基接种后，每24 h观察1次，2周后每周观察3次，若培养基变为紫红色或底层有紫色颗粒沉淀，经荧光染色证实有分枝杆菌时，报告分枝杆菌生长阳性。改良L-J培养基接种后3 d、7d观察结果，以后每周观察1次。8周未见液体培养基变紫红色或底层有紫色颗粒沉淀，固体培养基上未见菌落，报告分枝杆菌培养阴性。