人类免疫缺陷病毒1型感染基因诊断方法的建立

摘要

目的建立人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)基因诊断方法.方法随机选取80份全国送检的已确认的HIV阳性样品,从健康献血员中选取40份HIV阴性样品.分别提取人DNA和病毒RNA,再分别扩增HIV-1的gp41、pol和gag各基因区的3套反应系统,进行巢氏聚合酶链反应(nPCR)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR).将结果与血清学方法比较,观察结果是否一致.同时检测3套反应系统的敏感性、重复性和对HIV-1各亚型参考病毒株的扩增情况.结果用3套反应系统对80份阳性样本进行nPCR检测的阳性率为:gp41反应系统88.8%;pol反应系统83.8%;gag反应系统81.3%; 3套系统联合应用检出率90.0%.用RT-PCR检测阳性率为:gp41反应系统96.3%;pol反应系统91.3%;gag反应系统95.0%;3套反应系统联合应用检出率可达98.8%.阴性样品扩增均阴性,特异性为100%.3套反应系统不但可扩增HIV-1型M组的A、B、C、D、CRF01-AE、F、G、H亚型,还可扩增其N和O组毒株,且与HIV-2无交叉反应.nPCR最低检测限为1拷贝/PCR.gag和pol反应系统RT-PCR最低检测限为750 拷贝/ml;gp41反应系统最低检测限为150拷贝/ml.nPCR和RT-PCR扩增gp41、pol和gag基因区的重复性分别为:93.3%、90.0%、 86.7%和100%、96.7%、100%.结论建立的HIV-1基因诊断方法敏感性、特异性和重复性较好,且成本低廉,适合我国HIV检测实验室应用.