多重PCR/反向线点杂交检测B族溶血性链球菌耐药相关基因的研究

摘要

目的 建立和评价多重PCR-反向线点杂交方法(multiplex PCR/reverse line blot hybridization,mPCR/RLB)检测B族溶血性链球菌(GBS)9个耐药及耐药相关基因[erm(A/TR)、erm(B)、mef(A/E)、tet(M)、tet(O)、aphA-3、aad-6、int-Tn和mreA]的方法.方法 针对GBS的9个耐药及耐药相关基因分别设计9对引物及寡核苷酸探针.多重PCR同时扩增9个目的基因,获得生物素标记的PCR产物后,反向线点杂交同时检测上述9个基因.为明确mPCR/RLB方法的特异性和敏感性,对其中318株菌株的9个基因分别进行单个基因PCR扩增,比较两种检测方法结果.结果 用mPCR/RLB方法成功检测512株GBS分离株的9个耐药相关基因,除8株int-Tn和21株mef单个基因PCR阳性的菌株,RLB结果表现为单探针杂交外,其余菌株所有耐药基因RLB检测结果和单个基因PCR完全一致.结论 我们建立的多重PCR/RLB方法具有良好的敏感性和特异性,为GBS耐药基因的流行病学调查和监控提供了一个良好的检测工具.