应用噬菌体展示技术筛选血型A抗原表位的模拟多肽

摘要

目的筛选血型 A 抗原表位的模拟多肽,探讨其在血型 A 抗体检测中的应用价值。方法用血型 A 抗原特异性单克隆抗体 NaM87-1F6从噬菌体随机12肽库中筛选能与之结合的噬菌体展示肽。采用噬菌体 ELISA、噬菌体微筛选试验鉴定噬菌体与抗体的结合力。DNA 测定并推断特异性噬菌体克隆展示的多肽序列。凝集抑制试验检测单克隆噬菌体对抗体凝集红细胞的抑制作用,ABO-ELISA 初步分析噬菌体展示多肽检测血型抗体的效能。结果经筛选和鉴定后得到7个阳性克隆,其中6个展示多肽序列为 EYWYCGMNRTGC（C5）,1个为 QIWYERTLPFTF（C17）。凝集抑制试验提示2个噬菌体展示多肽可以特异性抑制 NaM87-1F6对 A 型红细胞的凝集作用。基于噬菌体多肽 C5、C17的 ABO-ELISA 检测血浆抗 A 抗体试验的受试者操作特性曲线下面积分别为0.889（P=0.000）和0.751（P=0.000）,ABO-ELISA 值与凝集试验抗体滴度间的 Spearman 相关系数分别为0.743（P＜0.01）和0.664（P＜0.01）。基于 C5的 ABO-ELISA 在临界值为0.300时其敏感度、特异度分别为82.2%和83.3%;基于 C17的 ABO-ELISA 在临界值为0.250时其敏感度、特异度分别为68.9%和63.3%。结论多肽 EYWYCGMNRTGC,QIWYERTLPFTF 可以模拟血型 A 抗原的表位。基于这些多肽的 ABO-ELISA 方法具有检测血型 A 抗原特异性抗体的潜能。