MicroRNA–145在乳腺癌中的表达及其对乳腺癌侵袭转移的影响

摘要

目的探讨微小RNA–145（microRNA–145,miR–145）在乳腺癌组织和细胞系中的表达及其与乳腺癌侵袭转移的关系。方法回顾性研究。用实时荧光定量PCR（FQ–PCR）检测39例乳腺癌组织及其对应癌旁组织以及1株乳腺上皮细胞系和4株乳腺癌细胞系的miR–145的表达;应用脂质体将miR–145表达质粒（pSIF–miR–145）及阴性对照（pSIF空白载体）转染人乳腺癌细胞系SK–BR–3,应用划痕和Transwell实验检测miR–145对细胞迁移及侵袭能力的影响;应用生物信息学分析预测miR–145的靶基因,用报告基因分析验证促血管生成素2（ANGPT2）为其靶基因,并用免疫印迹Western blot检测miR–145对ANGPT2蛋白表达的影响。结果乳腺癌组织中miR–145的相对表达量为45.93±22.02,癌旁组织的miR–145相对表达量为182.04±56.92,乳腺癌组织中miR–145的表达显著低于癌旁组织（U值为7,P＆0.01）。乳腺癌细胞系（MCF–7、MDA–MB–231、MDA–MB–468和SK–B–3）中miR–145相对表达依次为0.51±0.05、0.07±0.01、0.36±0.04、0.04±0.01,与正常对照相比,所有乳腺癌细胞系中miR–145表达均降低（t值分别为15.93、308.17、25.02、201.30,P均＆0.05）。同时高侵袭转移乳腺癌细胞系（MDA–MB–231、MDA–MB–468和SK–B–3）中miR–145的相对表达量显著低于低侵袭转移乳腺癌细胞系（MCF–7）（t值分别为14.18、3.78、15.20,P均＆0.05）。在SK–BR–3细胞中过表达miR–145后,划痕实验显示划痕愈合速度明显慢于阴性对照组。侵袭实验显示上调miR–145后穿过基质胶的平均细胞数为（137±37）个,对照组为（617±80）个,侵袭能力明显减弱（P＆0.01）。高表达miR–145能够抑制ANGPT2蛋白的表达;miR–145能够抑制ANGPT2 3’UTR的荧光素酶活性,突变miR–145与ANGPT2的结合位点后,荧光素酶活性得到恢复。结论 miR–145在乳腺癌细胞系和乳腺癌组织中均是低表达的;在乳腺癌细胞中过表达miR–145能够抑制细胞的侵袭转移能力;miR–145能够直接靶向作用于ANGPT2。（中华检验医学杂志,2015,38:613-616）