载脂蛋白A1在精子中定位及其抗体对人精子功能的影响

摘要

目的研究载脂蛋白A1在人精子中的定位和功能。方法基础研究。收集2017年10至12月来解放军总医院查体的健康男性精液标本20份。采用免疫荧光和免疫印迹来定位载脂蛋白A1在人精子中的部位。设空白对照组、兔多克隆IgG组、10、20和40μg/ml的APOA1抗体处理健康查体精液标本,37℃温箱孵育1、2和3 h后,通过计算机辅助系统（CASA）观察精子前向运动变化,流式细胞分析仪检测精子的凋亡率和透射电镜观察精子凋亡形态学变化。精子前向运动和凋亡率的变化,采用独立样本t检验。结果 APOA1蛋白主要定位于精子细胞头部,相对分子质量大小为31 000。精子前向运动在APOA1抗体孵育1、2和3 h后显著下降,空白对照组与APOA1抗体浓度20μg/ml组和40μg/ml组间差异有统计学意义。孵育1h后空白对照组（68.65%±15.70%）与APOA1抗体浓度20μg/ml组（48.45%±5.20%）和40μg/ml组（39.25%±7.89%）差异有统计学意义,t=2. 442和3. 345,P均＜0. 05。孵育2 h后空白对照组（55. 33%±10. 12%）与APOA1抗体浓度20μg/ml组（28. 68%±11.70%）和40μg/ml组（18. 13%±10. 52%）差异有统计学意义,t=3. 445和5. 097,P均＜0.05。孵育3 h后空白对照组（35. 73%±14. 08%）与APOA1抗体浓度20μg/ml组（15.53%±8.42%）和APOA1抗体浓度40μg/ml组（9.98%±7.08%）差异有统计学意义,t=2.462和3. 268,P均＜0. 05。APOA1抗体孵育精子2 h后,随着其浓度的增加精子凋亡率逐渐增加,空白对照组（16. 02%±4. 28%）与抗体浓度20μg/ml组（21. 72%±2. 67%）和40μg/ml组（28. 01%±3. 93%）间差异有统计学意义（t=3. 177和5. 834,P均＜0. 01）。40μg/ml APOA1抗体处理精子细胞4 h后,透射电镜观察到精子出现核空泡、膜疏松、不同凋亡期精子细胞等现象。结论精子头部APOA1在维持精子活力和调节精子凋亡中发挥一定作用,其作用机制还需进一步的研究。