实时逆转录PCR快速鉴别呼吸道合胞病毒亚型

摘要

目的:建立SYBR Green Ⅰ实时RT-PCR快速检测呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)A、B亚型的方法.方法:根据RSV G蛋白编码基因的核苷酸序列设计三条引物,其中P1为RSV通用引物,P2、P3分别为A、B亚型特异性引物.使用SYBR Green Ⅰ荧光染料结合熔解曲线分析进行检测,根据产物特征性熔解温度(melting temperatures Tm)鉴别RSV A、B亚型.结果:本法对RSV Long株(A亚型)和CH18375株(B亚型)进行检测,其Tm值分别为84.06和89.06℃;与常见呼吸道病毒间无交叉反应;48例临床标本中检出RSV阳性29例,其中A亚型占72.4%(21/29),B亚型占27.6%(8/29).结论:SYBR Green Ⅰ实时RT-PCR结合熔解曲线分析检测RSV亚型具有快速、简便、特异等特点,可对临床标本直接分型.