雌二醇诱导人成骨样细胞差异表达基因筛查

摘要

目的快速筛查17β雌二醇(E2)诱导人成骨肉瘤MG-63细胞株差异表达cDNA片段,寻找雌激素相关基因.方法改良cDNA代表性差异分析法(cDNA RDA)分离E2干预MG-63细胞株表达上调cDNA片段,Southern杂交证实后,制备阵列膜行点杂交,然后挑取阳性差异克隆测序,经同源比较分析,最后选取部分克隆标记探针行Northern印迹杂交.结果经过4轮消减和动力性富集后得到5个E2诱导人成骨肉瘤MG-63细胞表达上调的差异cDNA条带,Southern 杂交证明这些表达上调的cDNA片段来自E2干预的MG-63细胞;共得到600余个含有阳性插入片段的cDNA克隆,点杂交筛查得到120个差异表达克隆.选20个克隆测序得到15个序列,其中1个经Northern杂交证实E2干预后表达上调.结论 cDNA RDA能有效筛查差异表达cDNA片段,联合cDNA阵列点杂交可快速筛查差异表达基因,E2诱导人成骨肉瘤MG-63细胞某些基因表达上调.