乙型肝炎患者外周血CD4+ CD25+调节性T细胞表型与功能分析

摘要

目的观察急、慢性乙型肝炎（AHB、CHB）患者外周血CD4+CD25high曲调节性T细胞（Treg）的频率、表型和功能特点。方法采集16例AHB急性发病期（发病后第1周）患者、72例CHB患者和32例健康人的外周血,检测Treg频率,并分析其表面CD45RO、CD45RA、HLA-DR、CD95和细胞内细胞毒T淋巴细胞相关抗原4（CTLA-4）的表达水平。应用实时荧光定量RT-PCR检测CD4+ CD25+、CD4+ CD25-、CD4+和CD4-等细胞亚群和外周血单个核细胞（PBMC）的FoxP3 mRNA表达量。通过MACS免疫磁珠分选Treg,并应用[~3H]掺入法检测Treg抑制抗-CD3抗体和HBV抗原刺激的PBMC增殖能力,并观察Treg对HBV抗原或抗-CD3抗体刺激自体PBMC分泌IFNγ的影响。结果CD4+CD25highTreg高表达CD45RO、HLA-DR、CD95和细胞内CTLA-4,低表达CD45RA,并且较特异的高表达FoxP3 mRNA。乙型肝炎病人外周血Treg频率与健康对照（3．50±0．72）%比较无统计学差异,但CHB组（3．90±1．44）%显著高于AHB组（3．10±0．87）%,P＜0．05。Treg本身对于HBV抗原或抗- CD3抗体刺激没有明显的增殖反应和IFNγ分泌,但可抑制自体PBMC增殖和IFNγ分泌,其中对HBV抗原刺激引起的细胞反应抑制作用较强。结论HBV感染者外周血Treg较特异地表达FoxP3分子,能抑制HBV抗原特异性细胞免疫反应,这对于深入阐明CHB发病机制具有重要意义。