Na+/Ca2+交换体α-2(807-844)抗体的制备及其对大鼠心肌细胞Na+/Ca2+交换电流的抑制作用

摘要

目的 在制备和纯化抗心肌Na+/Ca2+交换体α-2(807- 844)肽段抗体的基础上,观察抗体对大鼠心肌细胞Na+/Ca2+交换电流及L型钙电流(ICa)、瞬时外向钾电流(Ito)和内向整流钾电流(Ik1)的影响.方法 利用人工合成的α-2(807-844)多肽免疫兔制备抗α-2(807- 844)抗体,抗血清经Protein A亲和柱纯化,利用全细胞膜片钳技术观察纯化后抗体对心肌细胞Na+/Ca2+交换电流(INa/Ca)、L型钙电流(ICa)、瞬时外向钾电流(Ito)和内向整流钾电流(Ik1)的影响.结果 经主动免疫,抗Na+/Ca2+交换体α- 2(840-877)抗血清效价达1∶243000,纯化后抗α-2(840- 877)抗体浓度为7.21 mg/mL.纯化后的抗体在SDS - PAGE时出现清晰的2条带,其分子量分别为25 kD和50 kD左右.在1 nmol/L～104 nmol/L浓度范围内,抗α-2抗体对成年大鼠心肌细胞外向和内向Na+/Ca2+变换电流均表现为剂量依赖性的抑制作用；对Ito和Ik1则均未见明显影响.此外,104 nmol/L该抗体对L型钙电流亦具有抑制作用.通过氨基酸序列比对发现,α- 2(807 - 844)肽段与L型钙通道第2结构域孔环(697～730位氨基酸)序列相似度为23.7％,可能是抗体对L型钙通道出现交叉反应的原因.结论 在1 nmol/L～103 nmol/L浓度范围内,抗心肌Na+/Ca2+变换体α-2(807- 844)抗体可特异性抑制大鼠心肌Na+/Ca2+变换活动；对L型钙通道电流、瞬时外向钾通道电流和内向整流钾通道电流均未见明显影响.